Kit de ensaio genético Dual-Lumi Dual-Luciferase Reporter

 

Nome do produto	Gato. Não.	Especificações.
Kit de ensaio genético Dual-Lumi Dual-Luciferase Reporter	G1701-100T	100T

 

 

O sistema luciferase é usado principalmente para detecção de genes repórteres. Os elementos reguladores da transcrição do gene alvo são clonados a montante e a jusante da Luciferase para construir um plasmídeo do gene repórter. As células transfectadas são então tratadas com medicamentos ou outros estímulos, e depois as células são recolhidas e lisadas, e a actividade da luciferase no lisado é medida. O efeito da regulação transcricional de estímulos exógenos, como drogas, nos genes alvo é determinado por

atividade da luciferase. No sistema de fluorescência dupla, dois tipos de fluorescência são introduzidos e detectados sem interferir um com o outro, um é usado como fluorescência de detecção e o outro é usado como fluorescência de referência interna para eliminar as diferenças no número de células e na transfecção. eficiência.

Este kit de ensaio genético Repórter Dual-Lumi Dual Luciferase (Firefly&Ranilla Luciferase) foi projetado para detectar a atividade da luciferase do vaga-lume usando primeiro a luciferina do vaga-lume como substrato e, em seguida, detectar a atividade da luciferase da ranilla usando a celenterazina como substrato enquanto extingue a fluorescência do vaga-lume. O kit é caracterizado por detecção rápida, alta sensibilidade, ampla faixa de detecção e os dois tipos de detecção de fluorescência não interferem entre si.

 

 

Envie com gelo seco; Armazenar a -80 graus longe da luz por 12 meses; -20 grau armazenado longe da luz, recomendado para uso dentro de 6 meses.

 

 

Número do componente	Componente	G1701-100T
G1701-1	Tampão de Lise Celular	50ml
G1701-2	Substrato de reação Firefly Luciferase (50×)	200 μL
G1701-3	Tampão de reação Firefly Luciferase	10ml
G1701-4	Substrato de reação Ranilla Luciferase (50×)	200 μL
G1701-5	Tampão de reação Ranilla Luciferase	10ml
Manual		1 unidade

 

 

1. Prepare 1 × solução de trabalho de reação Firefly Luciferase:

1.1. O kit é separado e descongelado à temperatura ambiente e misturado de cabeça para baixo para garantir a dissolução completa dos componentes. O substrato de reação Firefly Luciferase (50×) e o substrato de reação Ranilla Luciferase (50×) devem ser descongelados em gelo e centrifugados por um curto período de tempo para garantir que os reagentes afundem no fundo do tubo;

1.2. Diluir o substrato de reação de luciferase de vaga-lume (50×) 50 vezes com tampão de reação de luciferase de vaga-lume, ou seja, 10 μL de substrato de reação de luciferase de vaga-lume (50×) e 490 μL de tampão de reação de luciferase de vaga-lume são bem misturados para obter 500 μL de 1× vaga-lume solução de trabalho de reação de luciferase para uso extra;

1.3. O substrato de reação Ranilla Luciferase (50×) é diluído 50- vezes com o tampão de reação Ranilla Luciferase, ou seja, 10 μL de substrato de reação Ranilla Luciferase (50×) são misturados com 490 μL de tampão de reação Ranilla Luciferase para obter 500 μL de 1 × solução de trabalho de reação de luciferase de rim marinho. O Tampão de Reação Ranilla Luciferase misturou bem para obter 500 μL de 1× Substrato de Reação Ranilla Luciferase (50×);

Obs: Prepare de acordo com a dosagem para evitar desperdício. Recomenda-se que a solução de trabalho da reação da luciferase seja usada agora e armazenada a -20 grau para uso dentro de um mês para evitar congelamentos e descongelamentos repetidos.

2. Pré-tratamento e lise celular:

2.1. As células são implantadas nas placas correspondentes e transfectadas ou outros pré-tratamentos relacionados de acordo com as necessidades experimentais;

2.2. Para células aderentes: após remover o meio de cultura celular original, adicione a quantidade correspondente de Tampão de Lise Celular de acordo com a tabela abaixo para cobrir as células; Para células suspensas, transfira as células para um tubo de centrífuga, centrifugue para remover o meio e adicione a quantidade correspondente de Tampão de Lise Celular para ressuspender as células de acordo com a tabela abaixo;

 

Placa de cultura celular	Tampão de Lise Celular/poço
6-bem	500 μL
12-bem	300 μL
24-bem	200 μL
48-bem	150 μL
96-bem	100 μL

 

2.3. Após lise suficiente por 10-20 min à temperatura ambiente, as células são raspadas e coletadas em um tubo de centrífuga de 1,5 mL, centrifugadas a 4 graus, 12.000 g por 10 min, e o sobrenadante (lisado celular) é retido para uso extra;

3. Detecção de fluorescência:

3.1. A solução de trabalho de reação de luciferase de 1 × vaga-lume pré-preparada e a solução de trabalho de reação de luciferase de 1 × Ranilla são equilibradas à temperatura ambiente;

3.2. 1× solução de trabalho de reação de luciferase Firefly a 100 μL/poço é adicionada a uma placa de poço 96- branca opaca;

3.3. O sobrenadante da lise celular da etapa 2 é adicionado à placa de 96-poços acima a 20 μL/poço;

3.4. A oscilação horizontal é uniforme, o mais rápido possível, use Luminômetro, marcador enzimático multifuncional com módulo de detecção de quimioluminescência ou outros instrumentos que possam detectar bioluminescência, detecção de quimioluminescência -- detecção da atividade do gene repórter da luciferase do vaga-lume (intensidade de fluorescência);

3.5. 1× Solução de trabalho de reação de luciferase Ranilla a 100 μL/poço é adicionada aos poços onde a atividade do gene repórter da luciferase do vaga-lume foi detectada conforme descrito acima;

3.6. A oscilação horizontal é uniforme, o mais rápido possível, use Luminômetro, marcador enzimático multifuncional com módulo de detecção de quimioluminescência ou outros instrumentos que possam detectar bioluminescência, detecção de quimioluminescência -- detecção da atividade do gene repórter da luciferase Ranilla (intensidade de fluorescência).

 

 

1. Antes da detecção, a solução de trabalho 1× Firefly Luciferase Reaction precisa ser restaurada à temperatura ambiente antes do uso.

2. O tampão de reação da luciferase apresenta alguma precipitação após o descongelamento, o que é um fenômeno normal, e deve ser bem agitado antes do uso para garantir que esteja completamente dissolvido.

3. A solução de trabalho de reação 1×Luciferase é suscetível à oxidação, ao realizar a detecção de múltiplas amostras, a adição de 1× solução de trabalho de reação luciferase deve ser controlada dentro de um curto período de tempo, tanto quanto possível. para adição de amostra e preste atenção se o volume de sucção de cada poço da pipeta é consistente.

4. Para evitar interferência entre poços, recomenda-se a utilização de placas de poços brancas opacas.

5. Para sua saúde e segurança, use jaleco e luvas durante a operação.

 

Somente para uso em pesquisa!

 

 

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