Kit de detecção de micoplasma (sonda QPCR)

 

Nome do produto	Gato. Não.	Especificações.
Kit de detecção de micoplasma (sonda qPCR)	G1903-50	50 rxns
	G1903-100	100 rxns

 

 

Este produto é baseado no método de sonda Taqman para detectar 8 contaminações comuns por micoplasma em cultura de células e outros materiais biológicos, que é caracterizado por operação simples, alta sensibilidade e alta especificidade. As amostras detectáveis ​​são sobrenadantes de culturas de células realizadas 3-6 dias após inoculação;Se as amostras forem suspensões de células ou na presença de inibidores de qPCR, o DNA precisa ser extraído antes da reação ser realizada. Este kit também fornece PositiveControl, que pode ser adicionado à amostra antes da reação qPCR para evitar resultados falsos negativos se você não tiver certeza se a amostra contém um inibidor de qPCR

 

 

Enviar com gelo úmido; Armazenar a-20 graus de distância da luz por 12 meses.

 

 

Número do componente	Componente	G1903-50	G1903-100
G1903-1	2×MycoUniversal Blue qPCR Master Mix	500 µL	1ml
G1903-2	Primers Myco e mistura de sondas	60 µL	120 µL
G1903-3	Controle Positivo	50 µL	100 µL
Manual		1 unidade

 

 

1. Amplificador de PCR em tempo real.

2. Tubo ou placa qPCR para experimentos.

 

 

1. Preparação de amostra:

Células aderentes: Se for usado meio de cultura celular comumente usado, 1 μL de sobrenadante médio pode ser retirado e adicionado diretamente ao sistema de reação qPCR quando as células são inoculadas ou trocadas por mais de 3 dias.

Células em suspensão: o DNA precisa ser extraído e depois a reação qPCR.

Inibidores de reação: Se inibidores de qPCR estiverem presentes na solução de cultura celular, o DNA precisa ser extraído antes de realizar a reação de qPCR.

 

2. Sistema de reação qPCR sugerido:

Componente	20 μL de rxn
2×MycoUniversal Blue qPCR Master Mixa	10 μL
Mistura de primer e sonda Myco	1.2 μL
Samplab	1 μL
Água Livre de Nuclease	Adicione a 20 μL

 

um. O ROX Reference Dye não está incluído no qPCR Master Mix, ao configurar o programa qPCR, selecione o canal ROX como Nenhum; se precisar adicionar o corante de referência ROX, adquira o corante de referência ROX 50× e use-o na concentração final de 1×.

b. Se você não tiver certeza se a amostra contém inibidores de qPCR, adicione 0,5 µL de Controle Positivo ao sistema de reação qPCR ao mesmo tempo em que adiciona a amostra; Se for necessário Controle Negativo, a amostra pode ser substituída por Água Livre de Nuclease ou sem qualquer modelo.

 

3. Programa de reação qPCR (pode ser ajustado adequadamente de acordo com o modelo):

A. Método em duas etapas
Estágio	Etapa	Cciclo	Ttemperatura	Tempo
Estágio1	premutabilidade	1	95 graus	30 segundos
Estágio2	desnaturação	40	95 graus	15 segundos
	Recozimento/Extensão		60 graus	30 segundosa
B. Método de três etapas
Estágio	Etapa	Cciclo	Ttemperatura	Tempo
Estágio1	premutabilidade	1	95 graus	30 segundos
Estágio2	desnaturação	40	95 graus	15 segundos
	Recozimento		55-65 grau	10 segundos
	Extensão		72 graus	30 segundosa

Para melhorar a especificidade da amplificação, utilize um programa de duas etapas ou aumente a temperatura de recozimento;

Para melhorar a eficiência da amplificação, use um programa de três etapas ou aumente o tempo de extensão.

 

4. Parâmetros de reação qPCR:

A porção fluorescente repórter é FAM e a porção fluorescente de extinção é Nenhuma selecionada.

 

 

1. Depois de descongelar o reagente, misture-o suavemente de cabeça para baixo antes de usar. Não agite e misture para evitar bolhas.

2. Ao preparar a solução reacional, mantenha os reagentes em gelo.

3. Utilize novas pontas descartáveis ​​para preparação e distribuição da solução de reação para evitar ao máximo a contaminação entre amostras.

4. Evite congelamentos e descongelamentos repetidos e tente usá-lo dentro de um mês após o descongelamento.

5. Para sua saúde e segurança, use jaleco e luvas durante a operação.

 

 

ABI: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900HT, 7900 HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™, 7500/7500 Fast, ViiA 7™, QuantStudio™, PikoRealTM Cycler;

Stratagene: Mx3000P®, 3005P™, 4000™;

Bio-Rad: CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ5™, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon 2, Chromo4™;

Eppendorf: Realplex 2s, Mastercycler® ep, realplex;

IIIumina: Eco QPCR

Cefeida: SmartCycler®

Qiagen Corbett% 3a Rotor-Gene % c2% ae

Roche: LightCycler™

Takara: dados do termociclador

Análise: qTOWER

qTORRE: LineGene

 

Somente para uso em pesquisa!

 

 

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