Kit de genotipagem de camundongos

Este kit contém tampão de lise rápida para cauda, ​​dedos dos pés, orelhas de camundongo e mistura de PCR para genotipagem. O produto de lise não requer extração e purificação do genoma e pode ser usado diretamente como modelo para amplificação por PCR. É fácil de operar, causa poucos danos aos ratos e requer apenas vestígios de amostras de tecido para obter genotipagem altamente eficiente, detecção de nocaute e identificação de transgenes.

O 2×Mouse Genotyping PCR Mix (+Dye) inclui alta inibição e rápida amplificação de DNA polimerases, dNTPs e sistema tampão otimizado para alta eficiência e especificidade de amplificação direta. É adequado para amplificação do gene alvo de até 2 Kb.

Condições de armazenamento e envio

Enviar com gelo úmido; Tampão de lise para genotipagem de mouse Uma loja a 4 graus; Os demais componentes são armazenados a -20 grau, com validade de 12 meses.

Preparação de modelo

1. Preparar solução de lise

a: O tampão de lise para genotipagem de camundongo A aparece precipitados brancos sob baixa temperatura. Incubar a 37 graus por 2-3 min até que o precipitado branco desapareça antes de usar, isso não afetará o uso.

2. Misture suavemente e centrifugue instantaneamente.

3. Pegue uma ponta da cauda de 1-3 mm, uma orelha de rato de 2-3 mm de diâmetro (perfurada) ou um dedo do pé de 2-3 mm (excluindo o comprimento da unha), adicione lisado de amostra única ao amostra a ser lisada, incubar a 50 graus por 10 minutos e 95 graus por 3 minutos para lise completa.

4. Centrifugue o bloco de tecido lisado a 12.000 rpm durante 1 min até ao fundo do tubo e o sobrenadante pode ser utilizado diretamente como modelo para a reação PCR. O sobrenadante pode ser transferido para outro EP estéril e colocado a -20 grau para armazenamento a longo prazo.

Sistema de reação PCR recomendado (20μL):

a:A dosagem do modelo não deve exceder 1/10 do sistema de reação.

b: A concentração final do primer variou {{0}}.5-1.0 μM. A concentração recomendada de primer é de 0,5 μM. Poucos primers podem levar a um baixo rendimento de amplificação ou nenhuma amplificação, e muitos primers podem levar a uma amplificação não específica.

5. Condições recomendadas de amplificação por PCR:

1. Antes de usar o reagente, misture suavemente de cabeça para baixo. Não agite e oscile para evitar bolhas.

2. O amostrador deve ser lavado repetidamente em solução de hipoclorito de sódio a 2% após a coleta das amostras para evitar contaminação cruzada entre diferentes amostras.

3. O tecido deve ser cortado em pedacinhos para que o decote seja suficiente.

4. O tampão de lise de genotipagem de camundongo A e o tampão de lise de genotipagem de camundongo B devem ser usados ​​conforme são preparados e não devem ser deixados por muito tempo após a mistura, caso contrário, o efeito de lise será afetado.

5. Se o bloco de tecido for difícil de lise, o tempo de lisi pode ser estendido para 20 minutos a 50 graus.

6. Após a lise, o tecido de lise incompleto permanece no tubo EP, o que é um fenômeno normal e não afeta o uso.

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