Líquido de coloração de peróxido de hidrogênio vegetal (DAB)

Os tecidos vegetais produzem uma variedade de espécies reativas de oxigênio (ROS) sob condições de estresse. A atividade das EROs é muito grande e extremamente instável, portanto a detecção de EROs geralmente depende de seus produtos finais. O peróxido de hidrogênio é um tipo de espécie reativa de oxigênio. Catalisado pela catalase, o peróxido de hidrogênio pode reagir rapidamente com DAB (3, 3- tetracloridrato de diaminobenzidina) para formar um composto marrom-avermelhado, de modo a localizar o peróxido de hidrogênio nos tecidos. De acordo com o princípio básico, também é denominado método DAB. Com base no princípio acima, este produto é usado para coloração com peróxido de hidrogênio em tecidos vivos de plantas. Geralmente é aplicado nas pontas delicadas das raízes, folhas e outras manchas gerais; após a coloração, o local de acúmulo de peróxido de hidrogênio fica marrom a marrom escuro.

Transporte de gelo úmido; Armazenar em 2-8 grau, válido por 12 meses.

1. Preparação do reagente: 100 mg de DAB foram totalmente dissolvidos em 100 mL de tampão fosfato para obter a solução de trabalho de coloração de DAB, que foi armazenada a 4 graus sob luz e eficaz dentro de uma semana. Nota: DAB é sensível à luz e precisa ser protegido da luz durante o processo de dissolução. Se for difícil de dissolver, a dissolução pode ser promovida por agitação ultrassônica e magnética.

2. Colete mudas ou pontas de raízes de plantas sob estresse (como metais pesados), lave-as levemente com água pura e coloque-as em papel de filtro para drenar o excesso de água. Mudas de plantas ou pontas de raízes foram imersas em solução de corante de trabalho com coloração DAB em temperatura ambiente e mantidas longe da luz por 2-6 h até que a parte positiva aparecesse marrom escura e as partes restantes estivessem quase incolores ou mostrassem a cor da planta em si. (Ajuste o tempo de tingimento de acordo com o grau de juventude e desenvolvimento da cor das plantas)

3. Retire com cuidado as mudas ou folhas das plantas com uma pinça, mergulhe-as em água pura e enxágue-as 3-5 vezes, coloque-as em papel de filtro para retirar o excesso de água e depois mergulhe-as em etanol 95% a 40 graus por 3-16 h. O objetivo é retirar a clorofila das mudas das plantas ou das próprias folhas, podendo o etanol fresco 95% ser substituído diversas vezes durante a descoloração.

4. Retire as mudas ou folhas com uma pinça, mergulhe-as em água pura e enxágue-as 3-5 vezes, coloque-as em papel de filtro para remover o excesso de água, transfira as amostras para uma quantidade adequada de amostra DAB solução de preservação e deixe-os de molho por 30 minutos, depois tire fotos. As amostras podem ser armazenadas na solução à temperatura ambiente durante uma semana.

1. Depois que a solução de trabalho de coloração DAB for preparada, ela deve ser armazenada a 4 graus e mantida longe da luz, e usada dentro de uma semana. O tempo de armazenamento é muito longo e afetará a cor.

2. Como o peróxido de hidrogênio é fácil de decompor e quaisquer fatores externos podem estimular o estresse das plantas para produzir peróxido de hidrogênio, as amostras de plantas precisam ser coletadas frescas e coradas o mais rápido possível. Grupo de controle em branco negativo e positivo é recomendado.

3. Tire fotos o mais rápido possível para salvar os resultados após a coloração da amostra.

4. Use um jaleco e luvas descartáveis ​​durante a operação.

Somente para uso em pesquisa!

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