Introdução do produto

Nome do produto	Gato. Não.	Especificações.
Fosfatase Alcalina (Termossensível)	G3400-1000U	1000 U

Introdução do produto

Descrição do produto:	A Fosfatase Alcalina Servicebio® (Termossensível) catalisa a liberação de grupos fosfato 5' e 3'- de DNA, RNA, dNTP e rNTP. Esta enzima também remove grupos fosfato das proteínas.
Aplicações:	l Desfosforilação do DNA do vetor de clonagem para evitar a recircularização durante a ligação. l Limpeza do produto PCR: degradação de nucleotídeos antes do sequenciamento do produto PCR. l Desfosforilação do terminal 5' do ácido nucleico antes da marcação com polinucleotídeo quinase T4.
Fonte:	E.coli com um gene AP bacteriano clonado forma AntarcticBacteriumTAB5.
Pureza:	Maior ou igual a 95% por SDS-PAGE
Peso molecular	~35kDa
Concentração:	5 U/μL
Definição de Unidade de Atividade:	Uma unidade é a quantidade de enzima necessária para catalisar a desfosforilação de 1 µg da extremidade 5' do DNA pUC19 linearizado em 10 minutos a 37 graus. A desfosforilação é definida como uma inibição superior a 95% da religação do ADN plasmídico linearizado (conforme determinado pela transformação de E. coli).
10× Tampão de reação ALP:	500 mM de Bis-Tris-HCl, 10 mM de MgCl2, 1 mM de ZnCl2, pH 6,0.
Tampão de armazenamento (diluição):	Tris-HCl 10 mM, MgCl2 1 mM, ZnCl2 0,01 mM, glicerol a 50%, pH 7,4.
Inativação ou inibição	l Inibidores: quelantes de metais. · l Inativado por aquecimento a 80 graus por 2 minutos.
Condições de armazenamento:	Armazene a -20 graus por até 12 meses.

Conteúdo do produto

Número do componente	Componente	G3400-1000U
G3400-1	Fosfatase Alcalina (Termossensível)	200 μL
G3400-2	Tampão de reação 10×ALP	1ml
Manual		Uma cópia

Protocolo/Procedimentos de Ensaio

Este protocolo é adequado para remoção de grupos 3' e 5'-fosfato de DNA e RNA.

Descongele os reagentes congelados, misture e centrifugue brevemente.
Mantenha as enzimas no gelo.
Mantenha o tampão de reação 10×ALP em temperatura ambiente.

1. Prepare a seguinte mistura de reação contendo:

Componente	Volume
Amostra de DNA ou RNA	1-5 ug
Tampão de reação 10×ALP	2 μL
Fosfatase Alcalina (Termossensível)	1 μL
Água Livre de Nuclease	Para 20 μL
Volume total	20 μL

2. Misture bem, gire brevemente e incube a 37 graus por 15-30 minutos. O tempo ideal de incubação e a concentração da enzima devem ser determinados experimentalmente para cada substrato.

3. Pare a reação aquecendo por 2 minutos a 80 graus.

4. De acordo com as necessidades de experimentos subsequentes, o DNA ou RNA desfosforilado acima pode ser purificado de várias maneiras (como kit de purificação de DNA, extração de clorofórmio fenólico e método de precipitação com etanol).

Observação

1. A Fosfatase Alcalina, assim como a maioria das fosfatases alcalinas, é uma enzima dependente de Zn2+e Mg2+-. O tampão de reação ALP fornece Zn2+e Mg2+ suficientes para garantir a atividade enzimática.

1. A Fosfatase Alcalina é inibida por quelantes metálicos (por exemplo, EDTA), fosfato inorgânico e análogos de fosfato.

1. A atividade da Fosfatase Alcalina diminui na presença de agentes redutores (DTT, -ME).

2. A Fosfatase Alcalina deve ser enviada em gelo durante o manuseio e deve ser armazenada a -20 grau imediatamente após o uso.

1. Para sua segurança e saúde, use óculos de segurança, luvas ou roupas de proteção.

Somente para uso em pesquisa!

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